Tumorsuppressor-MicroRNA-139-5p hemmt Eigenschaften der Blasenkrebs-Zelllinie ECV-304 durch Targeting von Connexin 43
Blasenkrebs (BC) zählt zu den häufigsten malignen Tumoren des Urogenitalsystems, mit 549.393 neu diagnostizierten Fällen im Jahr 2018. Trotz Fortschritten in Diagnostik, Bildgebung, chirurgischen Techniken, Chemotherapie und Urintumormarkern hat sich die 5-Jahres-Überlebensrate kaum verbessert, was die Notwendigkeit weiterer Forschung zu den zugrundeliegenden Mechanismen unterstreicht. Connexine (CX), insbesondere Connexin 43 (CX43), zeigen eine Hochregulierung in diversen Krebsarten, einschließlich BC. Die molekularen Mechanismen von upstream-regulierenden MicroRNAs (miRNAs) für CX43 in BC bleiben jedoch unklar. Diese Studie untersucht die Rolle von MicroRNA-139-5p (miR-139-5p) als Tumorsuppressor in BC und dessen Interaktion mit CX43.
Mittels bioinformatischer Analysen (miRanda, miRWalk, TargetScan, miRDB) wurden 120 mögliche upstream-regulierende miRNAs für CX43 identifiziert. Daten der TCGA-Datenbank zeigten 22 miRNAs mit niedriger Expression in BC. Der Schnittmengenvergleich ergab miR-139-5p als Kandidaten. TCGA-Daten belegten eine signifikant reduzierte miR-139-5p-Expression in BC-Geweben (Tumor vs. Normal: 2,286 ± 0,017 vs. 3,211 ± 0,034; t = 11,540; P < 0,0001).
In humanen BC-Zelllinien (5637, T24, ECV-304) und der SV-HUC-1-Zelllinie (urotheliale Kontrolle) wurde miR-139-5p mittels qRT-PCR analysiert. Alle BC-Zelllinien wiesen eine signifikante Herunterregulierung auf, insbesondere ECV-304, die für Folgestudien ausgewählt wurde.
Die Überexpression von miR-139-5p (via Mimic-Transfektion) reduzierte die Proliferation von ECV-304 (P = 0,001) und T24-Zellen (P = 0,005) im CCK-8-Assay. Transwell-Assays zeigten eine gehemmte Invasion (P = 0,001) und Migration (P = 0,001) in ECV-304. Ein Dual-Luciferase-Reporterassay bestätigte CX43 als direktes Ziel von miR-139-5p: Die Luciferase-Aktivität von CX43-wt sank unter Mimic-Behandlung (0,356 ± 0,048 vs. 0,916 ± 0,063; t = 7,085; P = 0,002), während CX43-mut unbeeinflusst blieb.
qRT-PCR und Western Blot belegten eine reduzierte CX43-mRNA- (P = 0,005) und Protein-Expression (P = 0,002) nach miR-139-5p-Überexpression. Ein Rescue-Assay (si-CX43 + miR-139-5p-Mimic) verstärkte die tumor-suppressiven Effekte auf Proliferation (P < 0,01), Invasion (P = 0,028) und Migration (P = 0,014), was auf eine CX43-abhängige Wirkung hindeutet.
Connexine bilden Gap Junctions für interzelluläre Kommunikation. Während CX43 in Tumoren wie Brust- oder Lungenkrebs herunterreguliert ist, zeigt es in BC eine Hochregulierung, möglicherweise als Treiber der Progression. MiR-139-5p, ein in diversen Krebsarten bekannter Tumorsuppressor, unterdrückt BC-Phänotypen durch CX43-Targeting. Diese Ergebnisse unterstreichen das therapeutische Potenzial von miR-139-5p und CX43 in der BC-Behandlung. Weitere Studien, einschließlich in vivo-Modellen, sind erforderlich, um die klinische Relevanz zu validieren.
DOI: 10.1097/CM9.0000000000000455